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PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

糞腸球菌OXA (Orexin A) ELISA Kit拉丁屬名: faecalis

阿孫鏈霉菌ANG I (Angiotensin I) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces abikoensis

同絲毛殼SPARC (Secreted Protein Acidic And Rich In Cysteine) ELISA Kit拉丁屬名: Chaetomium homopilatum

食品檢測用鼠傷寒沙門氏菌α1BG (Alpha-1-B-Glycoprotein) ELISA Kit拉丁屬名: Salmonella typhimurium for Food Analysis

解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種Anti-MPO (Anti-Myeloperoxidase Antibody) ELISA Kit拉丁屬名: Bacilamyloliquefaciens  subsp.amyloliquefaciens

大麗輪枝孢OxLDL (Oxidized Low Density Lipoprotein) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

枯草芽孢桿菌KIM-1 (Kidney Injury Molecule 1) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  subtilis

雞白痢沙門氏菌P27 (P27 Protein) ELISA Kit拉丁屬名: pullorum

放射桿狀根瘤菌PF4 (Platelet Factor 4) ELISA Kit 拉丁屬名: Rhizobium radiobacter

壺黑蛋巢布諾德變型CS (Chondroitin Sulfate) ELISA Kit拉丁屬名: Cyathus olla f. brodiensis

香菇PC (Plasma Anticoagulant Protein C) ELISA Kit拉丁屬名: Lentinula edodes

谷氨酸棒桿菌α1-AGP (Alpha-1-Acid Glycoprotein) ELISA Kit

注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

釀酒酵母PLC (Phospholipase C) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

黃曲霉TYR (Tyrosinase) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus  flavus

棲土曲霉IL-9 (Interleukin 9) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus terricola
梨孢鐮刀菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Islet 1  基因增強結(jié)合蛋白1抗體積雪草苷asiaticoside中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C48H78O19 分 子 量: 959.12

Lipin 1  磷脂酸磷酸酯酶LPIN1抗體維生素B6Pyridoxine hydrochloride中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C8H11NO3.HCl;C8H12ClNO3 分 子 量: 205.64

AP-TNAP/ALPL  堿性磷酸酶抗體對羥基苯甲酸4-Hydroxybenzoic acid中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C7H6O3 分 子 量: 138.12074

PGC1 beta  過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1β抗體肌氨酸Sarcosine中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C3H7NO2 分 子 量: 89.09318

PGC1 alpha + beta  過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α+β抗體星魚甾醇Ergosta-7,22-dien-3-ol,(3b,*,22E)-對照藥材 分 子 式: C28H46O 分 子 量: 398.66424

SERPINA12/Vaspin  內(nèi)臟脂肪組織源性絲氨酸蛋白酶抑制蛋白抗體異黃芪皂苷IIsoastragaloside I中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C45H72O16 分 子 量: 869.043580000001

SIRT4/SIR 2 like protein 4  沉默調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白4抗體林澤蘭內(nèi)酯CEupalinilide C中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C20H24O7 分 子 量: 376.40036